操作指南 | AAV感染胰腺注射tips

❶ 将麻醉后的小鼠仰卧位固定，持续给予异氟烷。

❷ 去除小鼠下胸部及腹部毛发，暴露皮肤，用70%乙醇纱布反复擦拭，清洁并消毒手术区域。

❸ 在上腹部正中做1.5cm切口，注意避免损伤腹腔内器官。

❹ 用无菌棉签轻柔牵拉胃，展开十二指肠，暴露胆胰管及其与十二指肠的结合部（即Oddi括约肌）。腹腔外的肠管用温生理盐水浸湿的无菌纱布覆盖，避免组织干燥与热量流失。

❺ 在胰管分支上方的胆总管处放置微夹钳，阻断胆总管通路，防止输注液反流进入肝脏。

❻ 用30G针头在Oddi括约肌对侧的十二指肠壁制作微小穿刺孔，再将31G钝头导管经十二指肠壁穿刺孔穿过Oddi括约肌，导管尖端定位于胆胰管的胰管分支起始处；若解剖结构不清晰，尖端仅需刚过Oddi括约肌即可。

❼ 用微夹钳夹在Oddi括约肌处，防止输注过程中液体反流、渗漏。通过导管缓慢匀速注入AAV。

❽ 注射完成后，先移除Oddi括约肌处的微夹钳，轻柔拔出导管，再移除胆总管处的微夹钳。

❾ 缝合十二指肠壁的穿刺孔；将肠管放回腹腔，再逐层缝合腹壁肌肉层与皮肤。

❿ 术后将小鼠放回铺有37℃恒温加热垫的饲养笼中，单笼饲养直至完全苏醒，全程保温。

胰管注射操作示意图

（Xiangwei Xiao, Nat Protoc., 2014）

❶ 提起小鼠尾巴，将其放在鼠笼盖或其他粗糙表面上。

❷ 小鼠向前挣扎爬行时，再用左手拇指和食指抓住鼠耳和颈部皮肤。

❸ 小鼠于手心中后，用无名指和小指夹其背部皮肤和尾部，腹部向上，头呈低位。

❹ 一手持注射器，另一手抓紧背部皮肤使腹部皮肤紧绷，在小鼠两大腿根连线与腹中线交叉点一侧约0.3-0.5cm位置（偏左/偏右）刺入皮下。

❺ 针头到达皮下后，沿皮下向前推进2-3cm，然后注射器针头与皮肤呈45°角刺入腹膜，慢慢感觉到抵抗力消失，即可快速推注病毒液体。

❻ 注射完毕后，轻轻将针头旋转一定角度，缓慢拔出针头，防止液体外漏，切记快进针、缓出针。

※ 注意：靠近胰腺处进行腹腔注射效果更佳哦！